利用高壓制備液相色譜裝備對千層塔中的石杉堿甲進行了分離提純放大研究，考察了填料大小、柱尺寸大小與上樣...

     近年來，從自然資源中提取具有生物活性化合物的研究日益引起了人們的廣泛關注。源于植物中的抗腫瘤藥物紫杉醇及抗瘧活性成分青蒿素的發現促使人們特別是工業界人士開展更廣泛的研究。研究人員竭力研究高效的分離篩選方法，試圖從植物、海洋生物及微生物等自然資源中發現新的有效化合物，同時也需要一個快速、有效的分離方法以分離目標化合物。因此，學術界及工業界都需要有效的制備分離技術及其應用經驗。
高壓制備液相色譜是一種使用高壓、大流量輸送系統在高分辨率、大內徑、高載量分離柱上進行樣品高純度分離的液相色譜制備方法。應用該方法分離的產品在純度、回收率、分離效率等方面遠遠優于傳統的制備方法，因此在生物制品、藥物研究和生產領域都得到了廣泛應用。 
在對高壓制備液相色譜分離純化過程進行優化時，影響分離純化效果的因素有很多，包括填料尺寸大小、色譜柱的柱徑、柱長、上樣量以及流動相的組成、流速等。將分析系統放大到制備型液相色譜意味著需要使用更大的制備柱、更高的流速和根據色譜柱的長度增加進樣量，在分析型液相色譜中，研究者已廣泛研究過填料尺寸、柱尺寸大小以及上樣方式等對分離效率的影響，但對制備型液相色譜分離純化過程進行優化的研究卻鮮有報道。
本文利用自行生產的高壓制備液相色譜裝備，對千層塔中的石杉堿甲的制備分離過程進行了實驗研究，著重考察了填料大小、柱尺寸大小以及上樣方式對柱效和分離度的影響。
1  實驗部分
1.1  儀器和試劑
DASIO C18填料（dp=10、20、30、40 μm，蘇州麥可旺志生物技術有限公司）；高壓制備液相色譜柱（ID 50 mm×650 mm、ID 50 mm×1 000 mm、ID 150 mm×650 mm）；動態軸向加壓液壓站（聊城萬合工業制造有限公司）；制備高壓輸液泵：GLP3250；紫外-可見檢測器：UC-3292；Rheodyne3725i六通進樣閥；色譜工作軟件及電腦。此外，還有高效液相色譜儀、高速離心機、旋轉蒸發儀。
氯仿、甲醇、氨水、硫酸、氫氧化鈉、純水均為分析純，石杉堿甲對照品（99.1%含量）。千層塔來源于重慶，經鑒定符合中華人們共和國藥典（2010版）規定，均為分析純試劑，使用前先經過整流處理再用孔徑為0.45 μm的微孔濾膜過濾。
1.2  工藝流程及方法
　　本文所建立的高壓制備液相色譜裝備分離工藝流程如圖1所示。樣品被注入色譜柱后，通過高壓制備輸液泵的壓力使洗脫液帶動樣品在固定相中移動，樣品組分依據兩相間作用能力的差別達到分離的目的，分離后的各組分經檢測器檢測，再經過工作站軟件和數據處理系統的運算處理以圖譜的形式呈現，最后通過餾分收集器分通道收集。